محیط کشت تریپتون واتر ایبرسکو

توضیحات

تریپتون واتر به دلیل دارا بودن تریپتوفان زیاد، بستر مناسبی برای تولید ایندول است و برای این منظور، از پپتون واتر قابل اطمینان تر است. توانایی ارگانیسم های خاص برای تجزیه آمینو اسید تریپتوفان با تشکیل ایندول خاصیت مهمی است که برای طبقه بندی و شناسایی باکتری ها به کار گرفته می شود.

ارگانیسم های خاصی تجزیه اسید آمینه تریپتوفان را  انجام می دهند که این کار با کمک آنزیم هایی که با فعالیت هیدرولیز واسطه تولید ایندول می شوند انجام می شود.

همچنین تریپتون واتر برای کشت ارگانیسم های non fastidious برای مطالعه الگوهای تخمیر کربوهیدرات ها و برای انجام آزمایش ایندول استفاده می شود.

ترکیبات تشکیل دهنده ی تریپتون واتر چیست و طرز تهیه ی آن چگونه است؟

مقادیر زیر منطبق با مقادیر قید شده در استانداردها است:

طرز تهیه:

• ۱۵ گرم از پودر را در 1000 میلی لیتر آب مقطر خالص حل کنید و آن را در یک ظرف بریزید.
• محلول به دست آمده را به آرامی حرارت دهید تا پودر به طور کامل در آن حل شود.
• پس از آن محلول را به مدت یک ربع در اتوکلاو با دمای ۱۲۱ درجه سانتی گراد استریل کنید.

چگونه ایندول تولید شده را تشخیص دهیم؟

ایندول تولید شده را می توان توسط Kovacs یا معرف Ehrlich تشخیص داد که هر دو روش را توضیح می دهیم:

معرف کوواکس

شرح آزمایش بدین صورت است که :

• ابتدا لوله‌های تریپتون واتر را کشت دهید و به مدت زمان 24 الی 48 ساعت در دمای 35 درجه سانتی گراد قرار دهید.
• به مقدار 2 میلی لیتر از محلول کواکس را بیفزایید و آن را بخوبی میکس کنید.
• اجازه دهید تا 10 دقیقه در همین حالت باقی بماند و نتیجه را بررسی نمایید.
• وجود رنگ قرمز تیره بر روی سطح الکل آمیلیک به معنی جواب مثبت وجود ایندول است. اما لزوماً عدم تغییر رنگ اصلی معرف مورد آزمایش به منزله ی جواب منفی نیست.

در واقع ایندول با آلدهید موجود در معرف ذکر شده ترکیب می شود تا رنگ قرمز را در لایه ی الکلی به وجود بیاورد و لایه ی الکل، رنگ قرمز را استخراج و در یک ناحیه متمرکز می کند.

تریپتون واتر همراه با برلیانت گرین بایل براث 2% به منظور تعیین محتمل ترین تعداد  E.coli در نمونه مواد غذایی به کار می رود.

رشد و تولید گاز در برلیانت گرین بایل براث و تولید ایندول در تریپتون واتر پس از انکوبه کردن هر دو محیط کشت در دمای 44±1 درجه سانتی گراد به عنوان پایه ای برای آزمایش احتمالی E. coli استفاده می شود.

معرف Ehrlich:

این روش هم تشابهاتی به روش قبلی دارد:

• در آغاز امر لوله‌های تریپتون واتر را کشت دهید.
• این لوله ها را به مدت زمان 24 الی 48 ساعت در دمای ۳۵ درجه در انکوباتور قرار دهید.
• مقدار کمی از محیطی که کشت داده اید را بازگردانید و به مقدار مساوی از معرف به آن ها بیفزایید.
• محلول را هم بزنید و بگذارید چند دقیقه در همان حالت بماند.
• رنگ سرخ بیانگر وجود ایندول است. اگر ایندول وجود داشته باشد، ممکن است با اضافه کردن محلول پتاسیم پرسولفات اشباع، این تغییر رنگ سریع تر رخ دهد.
• به عنوان یک روش جایگزین، ایندول را با تکان دادن محیط کشت ها با افزودن ۱ میلی لیتر اتر استخراج کنید، بگذارید محلول چند دقیقه بماند و سپس به مقدار 5 میلی لیتر از معرف Ehrlich اضافه کنید.
• انکوباتور کردن در دمای 44 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت برتری خاصی جهت تشخیص اشرشیاکلی دارد، چون این تنها ارگانیسم موجود در آب است که می تواند در این دما، ایندول تولید کند.

به منظور تعیین الگوهای تخمیر کربوهیدرات:

مقدار 1.8 میلی لیتر محلول phenol red با خلوص یک درصد را به 1000 میلی لیتر پپتون واتر هیدراته بیفزایید.

محلول را بخوبی مخلوط کنید.

آن را بین لوله هایی که حاوی لوله های دورهام وارونه است توزیع کنید.

در دمای ۱۲۱ درجه سانتی گراد به مدت یک ربع اتوکلاو کنید.

با حساسیت و به آرامی به مقدار لازم محلول کربوهیدرات استریل را بیفزایید تا به خلوص 1% برسد.

لوله ها را بچرخانید  تا کربوهیدرات ها توزیع شوند.

ظاهر محیط کشت تریپتون واتر چگونه است و در چه شرایطی آن را نگهداریم؟

محیط دهیدراته: خیلی کمرنگ و پودر بدون جریان

محیط آماده شده: محلول روشن خیلی کمرنگ

محیط پودری را در دمای 10 تا 30 درجه سانتی گراد نگه داری کنید و قبل از سر رسیدن تاریخ انقضای روی برچسب، آن را مصرف کنید.

محیط آماده شده را در دمای اتاق نگهداری کنید.

کنترل کیفیت تریپتون واتر