محیط کشت پپتون واتر ایبرسکو

توضیحات

پپتون واتر یک محیط رشد میکروبی است که از هضم گوارشی بافت حیوانات و Sodium Chloride تشکیل شده است. پی اچ میانگین آن تقریباً 7.2 در دمای ۲۵ درجه سانتی گراد است و حاوی مقدار زیادی تریپتوفان می ­باشد.

پپتون واتر یکی از پرکاربردترین محیط کشت های میکروبی است که برای تشخیص بیماری در انسان، ساخته نشده است.

این محیط کشت همچنین یک محیط براث غیر انتخابی است که می تواند به منظور غنی سازی ابتدایی جهت رشد باکتری ها استفاده شود.

حضور ایندول در این ترکیب را می توان با استفاده از Kovacs یا معرف Ehlrich نشان داد.

پپتون ها هیدرولیزهای پروتئینی هستند که در اثر هضم آنزیمی یا اسیدی مواد اولیه مختلف ایجاد می شوند و بسیاری از محیط های پیچیده حاوی پپتون ها به عنوان منبع نیتروژن هستند.

ترکیبات پپتون واتر چیست؟

پپتون ترکیبات نیتروژن و کربنی را تامین می کند، اسیدهای آمینه زنجیره ای طولانی، ویتامین ها و مواد مغذی اساسی را فراهم می کنند. نمک Sodium Chloride تعادل اسمزی محیط را حفظ می کند.

با هدف بررسی قابلیت تخمیر کربوهیدرات ها، ساکاروز، رامنوز، سالیسین کلاً به مقدار ۵/۰ درصد به طور مستقل به محیط پایه قبل یا بعد از استریلیزاسیون اضافه می شود.

اسیدیته شکل گرفته در طول فرآیند تخمیر را می شود با اضافه کردن اندیکاتور Phenol red، که تغییر رنگ محیط از قرمز به زرد در شرایط اسیدی را نشان می دهد، شناسایی کرد.

ظاهر محیط دهیدراته:  کرمی رنگ- سفید به قهوه ای مایل به زرد روشن، روان، همگون

ظاهر محیط آماده: کهربایی روشن، دارای ظاهری واضح و شفاف است و گاهی هم کمی کدورت میتواند داشته باشد.

طرز تهیه محیط کشت پپتون واتر

• اول ۱۵ گرم از پودر محیط کشت پپتون واتر را در 1000 میلی لیتر آب مقطر خالص حل کنید.
• محلول بدست آماده را به آرامی حرارت دهید و مرتباً آن را هم بزنید تا پودر آن بطور کامل حل شود.
• حالا محلول را با رعایت نکات ایمنی به مدت یک ربع و در دمای ۱۲۱ درجه ی سانتی گراد اتوکلاو کنید.

گزارش کار پپتون واتر

• میزان 8 میلی لیتر از محلول Phenol red 1% را به 1 لیتر پپتون واتر هیدراته بیفزایید.
• محلول را خوب میکس کنید و هم بزنید.
• مایع حاصل را بین لوله هایی که درون آن ها لوله دورهام های وارونه است تقسیم کنید.
• در دمای ۱۲۱ درجه سانتی گراد به مدت یک ربع اتوکلاو کنید.
• به آهستگی و خیلی آرام به مقدار کافی محلول کربوهیدرات استریل را اضافه کنید تا به یک درصد برسد.
• لوله ها را بچرخانید  تا کربوهیدرات ها توزیع شوند.

مراحل تعیین الگوی تخمیر کربوهیدرات

• لوله ها را با ارگانیسم های آزمایش کشت دهید.
• لوله ها را در دمای 35±2 درجه به مدت زمان 18 الی 48 ساعت در انکوباتور قرار دهید.
• تغییرات رنگ را مشاهده نمایید.

مراحل تست ایندول

• لوله ها را با ارگانیسم های آزمایش کشت دهید.
• لوله ها را در دمای 35±2 درجه سانتی گراد به مدت 18 الی 48 ساعت در انکوباتور قرار دهید.
• با استفاده از لوپ و آنس کشت، یک حلقه ی پر از محیط را بر روی ناحیه ی واکنش پخش کنید.
• منطقه واکنش را برای ظهور رنگ صورتی به مدت ۳۰ ثانیه بررسی کنید.

به منظور تعیین الگوی تخمیر کربوهیدرات:

اسید هنگام تخمیر کربوهیدرات به وجود می آید. با رنگ زرد در محیط کشت مشخص می شود. تولید گاز با حضور حباب های گاز در لوله ی تخمیر نمایان می شود.

جهت انجام تست ایندول:  تشکیل رنگ صورتی در DrySlide منطقه ی واکنش را جستجو کنید که بیانگر تست مثبت در تولید ایندول می باشد.