محیط کشت PDA لیوفیلکم ایتالیا

توضیحات

محیط کشت PDA لیوفیلکم ایتالیا محیطی است که جهت تشخیص، کشت و شمارش عصاره ها و قارچ های مربوط به مواد غذایی به کار می رود.

این محیط مطابق با توصیه های سازمان بهداشت عمومی آمریکاست. این توصیه ها برای صنایع غذایی و همچنین روش های منطبق داروسازی در راستای آماده سازی سوش های آزمایشی Aspergillus brasiliensis می باشد.

فرمول شیمیایی و ترکیبات تشکیل دهنده ی محیط کشت PDA لیوفیلکم ایتالیا

مقادیر زیر بر اساس اعلام خود شرکت لیوفیلکم ایتالیا بوده و مقادیر بر حسب گرم بر لیتر هستند. همچنین مقدار PH در این محیط در دمای 25 درجه سانتی گراد برابر با 0.2±5.6 می باشد.

در این ترکیب آب سیب زمینی و قند دکستروز از رشد انبوه قارچ حمایت می کنند که منجر به هاگ زایی کپک ها و تولید پیگمنت ها می شود.

کشت قارچ در محیط کشت PDA

در حالتی که محیط دهیدراته است ابتدا 42 گرم از پودر را در یک لیتر آب مقطر و یا آب دیونیزه میریزیم.

به خوبی هم میزنیم و تا زمان جوشیدن به آن گرما میدهیم و مرتباً با تکان دادن مواد را حل می کنیم.

سپس به مدت  15 دقیقه و در دمای 121 درجه سانتی گراد در اتوکلاو استریل کنید. هر آزمایشگاهی که با قارچ، باکتری و بالتبع با محیط کشت سروکار داشته باشد، نیاز ضروری به اتوکلاو دارد.

توجه داشته باشید که اگر محیط در جهت شمارش قارچها مورد استفاده قرار می گیرد می تواند برای فرونشاندن رشد باکتری ها گزینه ی مناسبی باشد.

این کار با افزودن 1 میلی لیتر لاکتیک اسید 10درصد به ازای هر 100 میلی لیتر از محیط کشت استریل در دمای 50 درجه سانتی گراد انجام می شود و تا هنگامی ادامه پیدا می کند که پی اچ به حدود 3.5 برسد.

ولی در حالتی که محیط آماده در بطری باشد باید محتویات داخل بطری را بر روی بن ماری قرار دهیم و با دمای 100 درجه سانتی گراد آن را ذوب کنیم.

باید درب بطری در حالت نیمه باز باشد و باید ماده بصورت محلولی در بیاید. سپس درب آن را محکم میبندیم و چندین بار سر و ته می کنیم تا کاملاً به حالت همگون در بیاید.

در این مرحله داشتن بطری با کیفیت و سایز مناسب بسیار اهمیت دارد. ممکن است شما بخواهید آن را در اتوکلاو قرار دهید، پس باید توانایی تحمل دما و فشار آن را داشته باشد.

پس از آن در دمای 45 الی 50 درجه سانتی گراد قرار می دهیم و آن را به خوبی هم میزنیم تا از جامد شدن و فوم شکل شدن آن جلوگیری شود.

در نهایت هم با رعایت عفونی نشدن محیط، آن را در پلیت ها توزیع می کنیم.

رویه ی تست، نتیجه گیری و کنترل کیفی در محیط PDA به چه صورت است؟

محیط را با روش pour-plate و یا تکنیک spread/streak تلقیح کنید.

در انکوباتور با دمای 20 الی 25 درجه به مدت 5 الی 7 روز و یا در دمای 25 الی 30 درجه و به مدت 18 الی 48 ساعت قرار دهید. شاید بتوان گفت مهم ترین دستگاه در کشت باکتری انکوباتور است.

رویه ی تجربی و عملی به محیطی که استفاده می شود بستگی دارد. خطوط کجی که از لوله ردشدند برای کشت و نگهداری محیط های خالص در اولویت هستند. آنها باید بوسیله ی لوپ کشت، تلقیح شوند و در انکوباتور تحت همان شرایطی که پلیت ها بودند، قرار بگیرند.

در مورد تفسیر نتایج فقط یک جمله می توان گفت که محیط را برای رشد قارچ امتحان کنید و مورفولوژی و شکل شناسی کلنی ها را مورد استفاده قرار دهید.

و اما در مورد کنترل کیفیت، محیط ها را با سه سوش میکروبی Aspergillus brasiliensis، Candida albicans و Saccharomyces cerevisiae کشت می دهیم و نتایج را در جدول زیر درج کردیم:

ظاهر محیط کشت PDA لیوفیلکم ایتالیا باید چگونه باشد و  نحوه ی نگهداری به چه طریقی است؟

در مورد ظاهر محیط کشت باید گفت که:

–        اگر محیط دهیدراته باشد و هنوز آماده نشده باشد، باید ظاهر آن بصورت غیر سیال، همگون و دارای رنگ بژ روشن باشد.

–        اما اگر محیط آماده باشد باید ظاهر آن کمی کدر  باشد و رنگش کهربایی روشن.

این محیط به شدت جاذب رطوبت است، پس باید در محیط کاملاً خشک و ترجیحاً در قوطی اصلی خودش نگهداری شود. درب قوطی باید محکم بسته شود تا از ورود رطوبت محیط جلوگیری شود.

دمای نگهداری باید بین 10 الی 30 درجه باشد ولی اگر محیط آماده بود باید در دمای 10 الی 25 درجه نگهداری شود.