کلاژناز نوع 1 بایوآیدیا

کلاژناز نوع 1 بایوآیدیا، آنزیمی از باکتری Clostridium histolyticum است که به‌طور اختصاصی پیوند بین یک اسید آمینه خنثی (X) و گلیسین را در توالی Proline–X–Glycine–Proline هیدرولیز می‌کند.

این توالی در ساختار کلاژن طبیعی مارپیچ سه‌گانه به‌طور مکرر تکرار شده و کلاژناز را قادر می‌سازد تا فیبریل‌های کلاژن در بافت‌های پیوندی را تجزیه کند.

فرمول خام کلاژناز نوع 1 بایوآیدیا شامل پروتئازها، پلی‌ساکاریدازها و لیپازها است که به‌صورت هم‌زمان سایر اجزای ماتریکس خارج سلولی (ECM) را نیز تجزیه می‌کنند.

به همین دلیل، این محصول یکی از مؤثرترین آنزیم‌ها برای جداسازی سلولی از بافت‌های چربی، کبدی، آدرنال و اپی‌تلیال است.

در کشت سلول، قطعاً با محیط های کشت سلولی سر و کار دارید. توصیه می کنیم با کلیک بر روی لینک آن ها را بررسی نمایید.

ویژگی‌های کلاژناز نوع 1 بایوآیدیا

پتانسی (Potency)

هر واحد از آنزیم معادل آزادسازی 1 میلی‌مول لوسین در 5 ساعت در دمای 37°C و pH=7.5 از کلاژن است.

فعالیت آنزیمی کلاژناز نوع 1 بایوآیدیا باید بیش از 125 U/mg باشد.

روش استفاده ی کلاژناز نوع 1 بایوآیدیا

آماده‌سازی محلول کاری

1. آنزیم لیوفیلیزه را در یکی از حلال‌های زیر حل کنید:

   • HBSS (حاوی Ca²⁺ و Mg²⁺)

   • PBS (حاوی Ca²⁺ و Mg²⁺)

   • DMEM/F12

2. محلول را با فیلتر مخصوص کشت سلول استریل کنید.

3. برای کاربردهای معمول از غلظت 0.1% تا 0.5% (W/V) یا 50 تا 100 واحد در میلی‌لیتر استفاده کنید.

4. محلول تازه تهیه‌شده را بلافاصله مصرف کنید یا در فریزر نگهداری کنید.

تجزیه بافت

1. بافت را با اسکالپل یا قیچی استریل به قطعات کوچک تقسیم کنید.

2. چندین بار با HBSS شستشو دهید.
   در این قسمت حتماٌ باید محلول هنکس بایوآیدیا را از قبل تهیه کرده باشید.

3. بافت را در 37°C روی شیکر یا سکوی غلتان قرار دهید.

4. برای افزایش کارایی، CaCl₂ 3 میلی‌مولار به محلول اضافه کنید.

5. پس از دایجست، محلول را از فیلتر استریل عبور دهید تا سلول‌ها از بافت جدا شوند.

6. سلول‌ها را با محلول تازه و نایکودنس شستشو دهید تا سوسپانسیون سلولی شفاف‌تری حاصل شود.

7. سلول‌ها را در محیط کشت مناسب سوسپانسه کرده و انکوبه کنید.

کاربردهای کلاژناز نوع 1 بایوآیدیا

1. جداسازی سلول‌های اولیه از بافت‌های پیوندی
   در این جداسازی، استفاده از محلول هنکس بایوآیدیا بسیار رایج است.

2. استخراج سلول‌های بنیادی مزانشیمی (MSC) از بافت چربی یا مغز استخوان
   اگر به دنبال استخراج این سلول ها هستید، حتماً سری به محیط کشت DMEM F12 بایوآیدیا بزنید.

3. تجزیه بافت‌های کبدی، آدرنال و اپی‌تلیال برای مطالعات in vitro
   در این فرآیند تجزیه، علاوه بر کلاژناز، محلول PBS بایوآیدیا هم کاربرد دارد.

4. فرآیند جداسازی سلول‌های پانکراس برای تحقیقات دیابت
   پروسه ی جداسازی سلول های پانکراس، نیازمند استفاده از محیط کشت RPMI1640 بایو آیدیا است، پیشنهاد می کنیم آن را بررسی کنید.